Разработване на индиректен ELISA метод за откриване на IgG антитяло срещу коронавирусен синдром на свинска остра диария на базата на рекомбинантен шипов протеин

Коронавирусът на синдрома на остра диария при свинете (SADS-CoV) е новооткрит ентеричен патогенен коронавирус при свинете, който може да причини водниста диария при новородени прасенца и да причини значителни икономически загуби за свиневъдството.Понастоящем няма подходящ серологичен метод за оценка на ефективността на инфекцията и ваксината със SADS-CoV, така че има спешна нужда от използване на ефективен ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA), за да се компенсира този дефицит.Тук е конструиран рекомбинантен плазмид, експресиращ SADS-CoV спайк (S) протеин, слят с човешки IgG Fc домейн, за да произведе рекомбинантен бакуловирус и да се експресира в HEK 293F клетки.S-Fc протеинът се пречиства с протеин G смола и запазва реактивността си с анти-човешки Fc и анти-SADS-CoV антитела.След това S-Fc протеинът беше използван за разработване на индиректен ELISA (S-iELISA) и оптимизиране на реакционните условия на S-iELISA.В резултат на това, чрез анализ на стойността на OD450nm на 40 SADS-CoV отрицателни серума, потвърдени чрез имунофлуоресцентен анализ (IFA) и Western blotting, граничната стойност беше определена на 0,3711.Коефициентът на вариация (CV) на 6 положителни за SADS-CoV серума в рамките на и между сериите на S-iELISA бяха по-малко от 10%.Тестът за кръстосана реактивност показа, че S-iELISA няма кръстосана реактивност с други вирусни серуми от свине.В допълнение, въз основа на откриването на 111 клинични серумни проби, общият процент на съвпадение на IFA и S-iELISA е 97,3%.Тестът за неутрализация на вируса със 7 различни стойности на OD450nm на серума показа, че стойността на OD450nm, открита от S-iELISA, корелира положително с теста за неутрализация на вируса.Накрая, S-iELISA беше извършена върху 300 серумни проби от свинеферми.Търговските комплекти от други ентеровируси по свинете показват, че нивата на положителни IgG за SADS-CoV, TGEV, PDCoV и PEDV са съответно 81,7%, 54% и 65,3%., съответно 6%.Резултатите показват, че S-iELISA е специфичен, чувствителен и възпроизводим и може да се използва за откриване на инфекция със SADS-CoV в свиневъдството.Тази статия е защитена с авторски права.всички права запазени.